تبلیغات
سم شناسی دانشگاه تربیت مدرس - روش ایمونوهسیتوشیمی (immunohistochemistry)
سه شنبه 16 اسفند 1390

روش ایمونوهسیتوشیمی (immunohistochemistry)

   نوشته شده توسط:    

نوشته شده توسط: عماد جعفرزاده

روش ایمونو هیستوشیمی نقش زیادی در گسترش علوم پزشكی و به ویژه تشخیصهای آسیب شناسی دارد. به نظر میرسد كه این روش در آینده نقش بیشتر و موثرتری را در پیشرفت این علوم ایفا كند. اساس این روش، قرار دادن برشهای بافتی تحت تأثیر آنتی بادیهای خاص برای تشخیص یك سری پروتئین خاص میباشد. پروتئینهای مورد نظر از طریق اتصال آنتی بادیها به یك سوبسترای رنگی شناسایی و حتی تعیین مقدار میشوند.

هرچند از نظر تئوری روش ایمونو هیستوشیمی روش ساده ای به نظر میرسد ولی در عمل در بسیاری از آزمایشگاهها انجام آن بصورت تكرار پذیر و قابل اطمینان بسیار مشكل است . فاكتورهای بسیاری در كیفیت نتایج نهایی نقش دارند و برای بدست آوردن نتایج ایده آل آشنایی با جزئیات این روش الزامی به نظر میرسد . یكی از فاكتورهای مهم در انجام ایمونوهیستوشیمی موفق استفاده از مواد و روشهای قابل اطمینان است . منابع زیادی برای تهیه مواد با كیفیت بالا وجود دارند . همچنین پروتكلهای فراوانی در این زمینه ارائه شده است. شركتهای زیادی كیتهای جهانی ارائه میكنند كه حاوی آنتی بادیها و مواد سوبسترای رنگی و حتی گاهی حاوی مواد بلوك كننده میباشند. این كیتها انجام IHC را تسهیل میكنند با این وجود تهیه هریك از این مواد از منابع مختلف و اجرای یك روش IHC منحصر به فرد كار غیر ممكن نیست و حتی در بسیاری از موارد نیز از نظر اقتصادی مقرون به صرفه میباشد. فاكتور موثر بعدی در كیفیت نتایج IHC ضخامت بافت هاست. ضخامت برشهای بكار رفته در IHC اهمیت زیادی دارد و در صورتی كه ضخامت و كیفیت برشها مناسب نباشد نتایج بدست آمده ایده آل نخواهد بود.

 

ایمونوهسیتو شیمی به دور روش انجام میگردد:

الف) رنگ آمیزی بافتهای آغشته به پارافین (Paraffin Embeded Tissues)

ب) رنگ آمیزی بافتهای منجمد شده (Frozen Tissues)

در بسیاری از آزمایشگاههای فارماكولوژی و پاتولوژی ، روش رایجی كه انجام میشود، روش IHC بافتهای پارافین است به همین دلیل در مورد روش رنگ آمیزی بافتهای منجمد پروتكلهای كمتری منتشر شده است.

 

 رنگ آمیزی بافتهای منجمد شده Frozen tissues

نكته كلیدی این روش ، فیكس كردن سریع بافتها و انجماد سریع آنها ( بدون تماس با هوای بیرون میباشد). فیكس كردن بافتها برای حفظ شكل ظاهری و جلوگیری از تخریب آنتی ژنهای داخل سلولها انجام میشود.

فیكس كردن به دو صورت انجام میشود:

 1- پرفیوژن بافتی

     2- قرار دادن قسمتی از بافت داخل محلول فیكساتیو

پرفیوژن بافتی برای مدلهای حیوانی و قرار دادن قسمتی از بافت در فیكساتیو برای مدل انسانی كاربرد دارد. شرایط انجام فیكساتیو اهمیت زیادی دارد. زیرا افزایش یا كاهش زمان آن پاسخ دهی به رنگ آمیزی را ضعیف میكند.

  مزایای روش IHC بافتهای منجمد شده

این روش نسبت به روشهای پارافین سریع تر است. نیازی به پارافین زدایی و جذب پروتئاز ندارد و تشخیص سریع و قابل اطمینانی ارائه میدهد.

 

 

 معایب روش IHC بافتهای منجمد شده

هرچند ظاهر بافتهای رنگ آمیزی شده در این روش خوب است ولی تفسیر نتایج حاصله از بافتهای پارافین همواره بهتر و آسانتر است.

 

 كاربرد مواد مورد استفاده در IHC بافتهای منجمد شده

1-   بافر فسفات 1X PBS با PH=7.4 : از این محلول برای شستشوی بافتها استفاده میشود.

2-   سرمهای بلوك كننده blocking serum مثلNGS و HS : روی سلول هایی را كه نمی خواهیم رنگ بگیرند، كاملاً میپوشانند.

3- (TX-100) 100-TritonX: این ماده یك سورفكتانت غیر یونی است كه كاربردهای زیادی دارد. در آزمایشگاههای بافت شناسی به عنوان یك ماده خیس كننده بكار میرود و سرعت انجام بعضی از پروتكلها را افزایش میدهد. این ماده بر روی سطح آب یك لایه نازك ایجاد میكند ولی به راحتی به كمك بافر مناسب میتوان در صورت لزوم آن را از محیط خارج نمود. همچنین این ماده نفوذ پذیری بافتها را نسبت به آنتی بادی افزایش میدهد. غشای پروتئینها حساسیت زیادی به تركیبات پراكسیداز دارد. TX-100 سطح پراكسیدازهای ناخواسته و املاح را كاهش میدهد.

4-   هیدروژن پراكسید: بعضی از سلولها یا بافتها حاوی پراكسیدازهای آندوژن هستند. در این حالت ممكن است پس زمینه بافت بسیار پر رنگ شود.  كاهش رنگ آن با استفاده از H2O2 قبل از مجاور كردن سلولها با آنتی بادیها نتیجه بسیار مطلوبی ایجاد میكند.

5-   كمپلكس AB: اساس كار این كمپلكس اتصال پروتئینی به نام Avidin به بیوتین هایی است كه قبلاً به آنتی بادیها ثانویه متصل شده اند در اصطلاح، به این آنتی بادیها biotinilized میگویند. Avidin تمایل زیادی برای اتصال به Biotin دارد (یك میلیون بار بیشتر از تمایل هر آنتی بادی به یك آنتی ژن). بنابراین اتصال این دو برگشت ناپذیر خواهد بود. همچنین بیشتر آنتی بادیها نیز قابلیت كونژوگه شدن با چندین مولكول بیوتین را دارند.

 

 

 

 مزایای استفاده از كمپلكس AB

1-   این روش حساسیت بالایی دارد و حتی آنتی بادیهای بسیار رقیق شده نیز میتوانند در این روش مورد استفاده قرار گیرند.

2-   این روش شدت رنگ خوبی ایجاد میكند و آنتی ژن هایی كه با روشهای دیگر قابل ردیابی نیستند در این روش به راحتی قابل مشاهده اند.

3-   پس زمینه بدست آمده در این روش بسیار كمرنگ است. زیرا آنتی بادیها در این روش با رقت بالایی بكار میرود.

4-   كمپلكس Avidin و آنتی بادی ثانویه متصل به بیوتین سریعاً كامل میشود و در اكثر موارد كمتر از یك ساعت طول میكشد.

5-   از نظر اقتصادی كاملاً به صرف است چرا كه مقادیر آنتی بادی مصرفی در این روش كم است.

6-   سوبستراهای رنگی مثل DAB كه در روشهای IHC وابسته به سیستم پراكسیداز بكار میرود با تبدیل نیكل سولفات به نیكل میتواند شدت رنگ DAB را افزایش دهد ( این مكانیسم هنوز ناشناخته است).

 


myfreecams token generator
شنبه 29 مهر 1396 07:19 ب.ظ
افسانه، آن چه وبلاگ است! این وبلاگ به ما اطلاعات مفیدی می دهد
آن بالا
payday loans bad credit
پنجشنبه 27 مهر 1396 10:40 ب.ظ
cash advance
payday loans no credit check
no credit check loans
online payday loans no credit check
std screening near me
جمعه 17 شهریور 1396 02:06 ق.ظ
این مقاله به کاربران اینترنت برای ایجاد وبلاگ جدید کمک خواهد کرد
یا حتی یک وبلاگ از ابتدا تا انتها.
chaturbate token generator free
دوشنبه 16 مرداد 1396 04:54 ب.ظ
Very great post. I simply stumbled upon your blog and wished to say that I
have truly enjoyed surfing around your blog posts. After all I will be subscribing
for your rss feed and I'm hoping you write again soon!
faranak
چهارشنبه 18 بهمن 1391 09:07 ق.ظ
tanks alot please give me more information a bout IHC.
محبوبه
سه شنبه 24 مرداد 1391 06:59 ق.ظ
درسته چیز زیادی نفهمیدم ولی افرین اقا عماد کارت درسته
....
چهارشنبه 31 خرداد 1391 11:43 ق.ظ

slaaaaam brgashtam hichi k naneveshtin ke
پاسخ : شما خب؟؟؟؟
...
جمعه 26 اسفند 1390 06:22 ب.ظ
..........................................
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر