تبلیغات
سم شناسی دانشگاه تربیت مدرس - روش ایمونوهسیتوشیمی (immunohistochemistry)
سه شنبه 16 اسفند 1390

روش ایمونوهسیتوشیمی (immunohistochemistry)

   نوشته شده توسط:    

نوشته شده توسط: عماد جعفرزاده

روش ایمونو هیستوشیمی نقش زیادی در گسترش علوم پزشكی و به ویژه تشخیصهای آسیب شناسی دارد. به نظر میرسد كه این روش در آینده نقش بیشتر و موثرتری را در پیشرفت این علوم ایفا كند. اساس این روش، قرار دادن برشهای بافتی تحت تأثیر آنتی بادیهای خاص برای تشخیص یك سری پروتئین خاص میباشد. پروتئینهای مورد نظر از طریق اتصال آنتی بادیها به یك سوبسترای رنگی شناسایی و حتی تعیین مقدار میشوند.

هرچند از نظر تئوری روش ایمونو هیستوشیمی روش ساده ای به نظر میرسد ولی در عمل در بسیاری از آزمایشگاهها انجام آن بصورت تكرار پذیر و قابل اطمینان بسیار مشكل است . فاكتورهای بسیاری در كیفیت نتایج نهایی نقش دارند و برای بدست آوردن نتایج ایده آل آشنایی با جزئیات این روش الزامی به نظر میرسد . یكی از فاكتورهای مهم در انجام ایمونوهیستوشیمی موفق استفاده از مواد و روشهای قابل اطمینان است . منابع زیادی برای تهیه مواد با كیفیت بالا وجود دارند . همچنین پروتكلهای فراوانی در این زمینه ارائه شده است. شركتهای زیادی كیتهای جهانی ارائه میكنند كه حاوی آنتی بادیها و مواد سوبسترای رنگی و حتی گاهی حاوی مواد بلوك كننده میباشند. این كیتها انجام IHC را تسهیل میكنند با این وجود تهیه هریك از این مواد از منابع مختلف و اجرای یك روش IHC منحصر به فرد كار غیر ممكن نیست و حتی در بسیاری از موارد نیز از نظر اقتصادی مقرون به صرفه میباشد. فاكتور موثر بعدی در كیفیت نتایج IHC ضخامت بافت هاست. ضخامت برشهای بكار رفته در IHC اهمیت زیادی دارد و در صورتی كه ضخامت و كیفیت برشها مناسب نباشد نتایج بدست آمده ایده آل نخواهد بود.

 

ایمونوهسیتو شیمی به دور روش انجام میگردد:

الف) رنگ آمیزی بافتهای آغشته به پارافین (Paraffin Embeded Tissues)

ب) رنگ آمیزی بافتهای منجمد شده (Frozen Tissues)

در بسیاری از آزمایشگاههای فارماكولوژی و پاتولوژی ، روش رایجی كه انجام میشود، روش IHC بافتهای پارافین است به همین دلیل در مورد روش رنگ آمیزی بافتهای منجمد پروتكلهای كمتری منتشر شده است.

 

 رنگ آمیزی بافتهای منجمد شده Frozen tissues

نكته كلیدی این روش ، فیكس كردن سریع بافتها و انجماد سریع آنها ( بدون تماس با هوای بیرون میباشد). فیكس كردن بافتها برای حفظ شكل ظاهری و جلوگیری از تخریب آنتی ژنهای داخل سلولها انجام میشود.

فیكس كردن به دو صورت انجام میشود:

 1- پرفیوژن بافتی

     2- قرار دادن قسمتی از بافت داخل محلول فیكساتیو

پرفیوژن بافتی برای مدلهای حیوانی و قرار دادن قسمتی از بافت در فیكساتیو برای مدل انسانی كاربرد دارد. شرایط انجام فیكساتیو اهمیت زیادی دارد. زیرا افزایش یا كاهش زمان آن پاسخ دهی به رنگ آمیزی را ضعیف میكند.

  مزایای روش IHC بافتهای منجمد شده

این روش نسبت به روشهای پارافین سریع تر است. نیازی به پارافین زدایی و جذب پروتئاز ندارد و تشخیص سریع و قابل اطمینانی ارائه میدهد.

 

 

 معایب روش IHC بافتهای منجمد شده

هرچند ظاهر بافتهای رنگ آمیزی شده در این روش خوب است ولی تفسیر نتایج حاصله از بافتهای پارافین همواره بهتر و آسانتر است.

 

 كاربرد مواد مورد استفاده در IHC بافتهای منجمد شده

1-   بافر فسفات 1X PBS با PH=7.4 : از این محلول برای شستشوی بافتها استفاده میشود.

2-   سرمهای بلوك كننده blocking serum مثلNGS و HS : روی سلول هایی را كه نمی خواهیم رنگ بگیرند، كاملاً میپوشانند.

3- (TX-100) 100-TritonX: این ماده یك سورفكتانت غیر یونی است كه كاربردهای زیادی دارد. در آزمایشگاههای بافت شناسی به عنوان یك ماده خیس كننده بكار میرود و سرعت انجام بعضی از پروتكلها را افزایش میدهد. این ماده بر روی سطح آب یك لایه نازك ایجاد میكند ولی به راحتی به كمك بافر مناسب میتوان در صورت لزوم آن را از محیط خارج نمود. همچنین این ماده نفوذ پذیری بافتها را نسبت به آنتی بادی افزایش میدهد. غشای پروتئینها حساسیت زیادی به تركیبات پراكسیداز دارد. TX-100 سطح پراكسیدازهای ناخواسته و املاح را كاهش میدهد.

4-   هیدروژن پراكسید: بعضی از سلولها یا بافتها حاوی پراكسیدازهای آندوژن هستند. در این حالت ممكن است پس زمینه بافت بسیار پر رنگ شود.  كاهش رنگ آن با استفاده از H2O2 قبل از مجاور كردن سلولها با آنتی بادیها نتیجه بسیار مطلوبی ایجاد میكند.

5-   كمپلكس AB: اساس كار این كمپلكس اتصال پروتئینی به نام Avidin به بیوتین هایی است كه قبلاً به آنتی بادیها ثانویه متصل شده اند در اصطلاح، به این آنتی بادیها biotinilized میگویند. Avidin تمایل زیادی برای اتصال به Biotin دارد (یك میلیون بار بیشتر از تمایل هر آنتی بادی به یك آنتی ژن). بنابراین اتصال این دو برگشت ناپذیر خواهد بود. همچنین بیشتر آنتی بادیها نیز قابلیت كونژوگه شدن با چندین مولكول بیوتین را دارند.

 

 

 

 مزایای استفاده از كمپلكس AB

1-   این روش حساسیت بالایی دارد و حتی آنتی بادیهای بسیار رقیق شده نیز میتوانند در این روش مورد استفاده قرار گیرند.

2-   این روش شدت رنگ خوبی ایجاد میكند و آنتی ژن هایی كه با روشهای دیگر قابل ردیابی نیستند در این روش به راحتی قابل مشاهده اند.

3-   پس زمینه بدست آمده در این روش بسیار كمرنگ است. زیرا آنتی بادیها در این روش با رقت بالایی بكار میرود.

4-   كمپلكس Avidin و آنتی بادی ثانویه متصل به بیوتین سریعاً كامل میشود و در اكثر موارد كمتر از یك ساعت طول میكشد.

5-   از نظر اقتصادی كاملاً به صرف است چرا كه مقادیر آنتی بادی مصرفی در این روش كم است.

6-   سوبستراهای رنگی مثل DAB كه در روشهای IHC وابسته به سیستم پراكسیداز بكار میرود با تبدیل نیكل سولفات به نیكل میتواند شدت رنگ DAB را افزایش دهد ( این مكانیسم هنوز ناشناخته است).

 


kasino
جمعه 16 شهریور 1397 09:58 ق.ظ
kasino
cassino
casino games
online casino gambling
casino slots
online casino games
پنجشنبه 1 شهریور 1397 06:19 ب.ظ
kasino
online casino slots
casino games real money
slot online
play casino games online
online gambling casino
دوشنبه 29 مرداد 1397 10:33 ق.ظ
online casino slots
casino slots
online gambling casino
casino games
slot online
casino games
دوشنبه 29 مرداد 1397 10:02 ق.ظ
play casino games online
online casino gambling
casinos online
online casino slots
online casino gambling
online casino
دوشنبه 15 مرداد 1397 09:57 ب.ظ
best online casino
best online casino
online casino real money
online casino slots
online casino games
casinos online
چهارشنبه 10 مرداد 1397 08:31 ب.ظ
kasino
online casino slots
best online casino
online casino
cassino
elder scrolls online quick slot
سه شنبه 2 مرداد 1397 06:54 ب.ظ
online roulette for mac
online casino europa
baccarat 10 piece cookset
free bet grand national 2016
no deposit bonus withdrawable
order cialis online canada
سه شنبه 2 مرداد 1397 04:20 ق.ظ
canadian pharmacy viagra
viagrabuyonline.com
prescription drugs online without doctor
new usa online casinos 2017
شنبه 30 تیر 1397 01:45 ب.ظ
casino online usa
free casino games and poker
casino games slots
new usa online casinos 2017
play casinos
شنبه 30 تیر 1397 01:03 ب.ظ
casino online gambling
casino online usa
casino online gambling
casino games roulette
online roulette software
جمعه 29 تیر 1397 09:11 ق.ظ
no deposit bonus royal ace
online roulette malaysia
playtech casino bonus 400
win money online gambling
sports betting no deposit bonus
casino games free online
پنجشنبه 28 تیر 1397 10:43 ب.ظ
casino online subtitrat
best online casino games free
top rated free online casino games
casino online
casino rewards sites
سه شنبه 26 تیر 1397 01:54 ق.ظ
no deposit bonus europa casino
online roulette kostenlos
baccarat online gclub ไม่ ต้อง download
fruit machine help
free online slots 40 line
quatro casino no deposit bonus
دوشنبه 25 تیر 1397 12:05 ق.ظ
slots beer
yellowhead casino
fruit machine for sale kent
online casinos that use paypal
baccarat pressure cooker 7 litre
casino games roulette
شنبه 23 تیر 1397 04:30 ق.ظ
casino online subtitrat
online casino
play casinos
free casino games and poker
casino g
جمعه 22 تیر 1397 06:38 ب.ظ
casino games slots
online casino slots
casino online free
casino games real money
casino online
جمعه 22 تیر 1397 01:55 ب.ظ
online casino slots
casino games roulette
new usa online casinos
casinos online
std screening near me
جمعه 17 شهریور 1396 02:06 ق.ظ
این مقاله به کاربران اینترنت برای ایجاد وبلاگ جدید کمک خواهد کرد
یا حتی یک وبلاگ از ابتدا تا انتها.
chaturbate token generator free
دوشنبه 16 مرداد 1396 04:54 ب.ظ
Very great post. I simply stumbled upon your blog and wished to say that I
have truly enjoyed surfing around your blog posts. After all I will be subscribing
for your rss feed and I'm hoping you write again soon!
faranak
چهارشنبه 18 بهمن 1391 09:07 ق.ظ
tanks alot please give me more information a bout IHC.
محبوبه
سه شنبه 24 مرداد 1391 06:59 ق.ظ
درسته چیز زیادی نفهمیدم ولی افرین اقا عماد کارت درسته
....
چهارشنبه 31 خرداد 1391 11:43 ق.ظ

slaaaaam brgashtam hichi k naneveshtin ke
پاسخ : شما خب؟؟؟؟
...
جمعه 26 اسفند 1390 06:22 ب.ظ
..........................................
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر