تبلیغات
سم شناسی دانشگاه تربیت مدرس - روش ایمونوهسیتوشیمی (immunohistochemistry)
سه شنبه 16 اسفند 1390

روش ایمونوهسیتوشیمی (immunohistochemistry)

   نوشته شده توسط:    

نوشته شده توسط: عماد جعفرزاده

روش ایمونو هیستوشیمی نقش زیادی در گسترش علوم پزشكی و به ویژه تشخیصهای آسیب شناسی دارد. به نظر میرسد كه این روش در آینده نقش بیشتر و موثرتری را در پیشرفت این علوم ایفا كند. اساس این روش، قرار دادن برشهای بافتی تحت تأثیر آنتی بادیهای خاص برای تشخیص یك سری پروتئین خاص میباشد. پروتئینهای مورد نظر از طریق اتصال آنتی بادیها به یك سوبسترای رنگی شناسایی و حتی تعیین مقدار میشوند.

هرچند از نظر تئوری روش ایمونو هیستوشیمی روش ساده ای به نظر میرسد ولی در عمل در بسیاری از آزمایشگاهها انجام آن بصورت تكرار پذیر و قابل اطمینان بسیار مشكل است . فاكتورهای بسیاری در كیفیت نتایج نهایی نقش دارند و برای بدست آوردن نتایج ایده آل آشنایی با جزئیات این روش الزامی به نظر میرسد . یكی از فاكتورهای مهم در انجام ایمونوهیستوشیمی موفق استفاده از مواد و روشهای قابل اطمینان است . منابع زیادی برای تهیه مواد با كیفیت بالا وجود دارند . همچنین پروتكلهای فراوانی در این زمینه ارائه شده است. شركتهای زیادی كیتهای جهانی ارائه میكنند كه حاوی آنتی بادیها و مواد سوبسترای رنگی و حتی گاهی حاوی مواد بلوك كننده میباشند. این كیتها انجام IHC را تسهیل میكنند با این وجود تهیه هریك از این مواد از منابع مختلف و اجرای یك روش IHC منحصر به فرد كار غیر ممكن نیست و حتی در بسیاری از موارد نیز از نظر اقتصادی مقرون به صرفه میباشد. فاكتور موثر بعدی در كیفیت نتایج IHC ضخامت بافت هاست. ضخامت برشهای بكار رفته در IHC اهمیت زیادی دارد و در صورتی كه ضخامت و كیفیت برشها مناسب نباشد نتایج بدست آمده ایده آل نخواهد بود.

 

ایمونوهسیتو شیمی به دور روش انجام میگردد:

الف) رنگ آمیزی بافتهای آغشته به پارافین (Paraffin Embeded Tissues)

ب) رنگ آمیزی بافتهای منجمد شده (Frozen Tissues)

در بسیاری از آزمایشگاههای فارماكولوژی و پاتولوژی ، روش رایجی كه انجام میشود، روش IHC بافتهای پارافین است به همین دلیل در مورد روش رنگ آمیزی بافتهای منجمد پروتكلهای كمتری منتشر شده است.

 

 رنگ آمیزی بافتهای منجمد شده Frozen tissues

نكته كلیدی این روش ، فیكس كردن سریع بافتها و انجماد سریع آنها ( بدون تماس با هوای بیرون میباشد). فیكس كردن بافتها برای حفظ شكل ظاهری و جلوگیری از تخریب آنتی ژنهای داخل سلولها انجام میشود.

فیكس كردن به دو صورت انجام میشود:

 1- پرفیوژن بافتی

     2- قرار دادن قسمتی از بافت داخل محلول فیكساتیو

پرفیوژن بافتی برای مدلهای حیوانی و قرار دادن قسمتی از بافت در فیكساتیو برای مدل انسانی كاربرد دارد. شرایط انجام فیكساتیو اهمیت زیادی دارد. زیرا افزایش یا كاهش زمان آن پاسخ دهی به رنگ آمیزی را ضعیف میكند.

  مزایای روش IHC بافتهای منجمد شده

این روش نسبت به روشهای پارافین سریع تر است. نیازی به پارافین زدایی و جذب پروتئاز ندارد و تشخیص سریع و قابل اطمینانی ارائه میدهد.

 

 

 معایب روش IHC بافتهای منجمد شده

هرچند ظاهر بافتهای رنگ آمیزی شده در این روش خوب است ولی تفسیر نتایج حاصله از بافتهای پارافین همواره بهتر و آسانتر است.

 

 كاربرد مواد مورد استفاده در IHC بافتهای منجمد شده

1-   بافر فسفات 1X PBS با PH=7.4 : از این محلول برای شستشوی بافتها استفاده میشود.

2-   سرمهای بلوك كننده blocking serum مثلNGS و HS : روی سلول هایی را كه نمی خواهیم رنگ بگیرند، كاملاً میپوشانند.

3- (TX-100) 100-TritonX: این ماده یك سورفكتانت غیر یونی است كه كاربردهای زیادی دارد. در آزمایشگاههای بافت شناسی به عنوان یك ماده خیس كننده بكار میرود و سرعت انجام بعضی از پروتكلها را افزایش میدهد. این ماده بر روی سطح آب یك لایه نازك ایجاد میكند ولی به راحتی به كمك بافر مناسب میتوان در صورت لزوم آن را از محیط خارج نمود. همچنین این ماده نفوذ پذیری بافتها را نسبت به آنتی بادی افزایش میدهد. غشای پروتئینها حساسیت زیادی به تركیبات پراكسیداز دارد. TX-100 سطح پراكسیدازهای ناخواسته و املاح را كاهش میدهد.

4-   هیدروژن پراكسید: بعضی از سلولها یا بافتها حاوی پراكسیدازهای آندوژن هستند. در این حالت ممكن است پس زمینه بافت بسیار پر رنگ شود.  كاهش رنگ آن با استفاده از H2O2 قبل از مجاور كردن سلولها با آنتی بادیها نتیجه بسیار مطلوبی ایجاد میكند.

5-   كمپلكس AB: اساس كار این كمپلكس اتصال پروتئینی به نام Avidin به بیوتین هایی است كه قبلاً به آنتی بادیها ثانویه متصل شده اند در اصطلاح، به این آنتی بادیها biotinilized میگویند. Avidin تمایل زیادی برای اتصال به Biotin دارد (یك میلیون بار بیشتر از تمایل هر آنتی بادی به یك آنتی ژن). بنابراین اتصال این دو برگشت ناپذیر خواهد بود. همچنین بیشتر آنتی بادیها نیز قابلیت كونژوگه شدن با چندین مولكول بیوتین را دارند.

 

 

 

 مزایای استفاده از كمپلكس AB

1-   این روش حساسیت بالایی دارد و حتی آنتی بادیهای بسیار رقیق شده نیز میتوانند در این روش مورد استفاده قرار گیرند.

2-   این روش شدت رنگ خوبی ایجاد میكند و آنتی ژن هایی كه با روشهای دیگر قابل ردیابی نیستند در این روش به راحتی قابل مشاهده اند.

3-   پس زمینه بدست آمده در این روش بسیار كمرنگ است. زیرا آنتی بادیها در این روش با رقت بالایی بكار میرود.

4-   كمپلكس Avidin و آنتی بادی ثانویه متصل به بیوتین سریعاً كامل میشود و در اكثر موارد كمتر از یك ساعت طول میكشد.

5-   از نظر اقتصادی كاملاً به صرف است چرا كه مقادیر آنتی بادی مصرفی در این روش كم است.

6-   سوبستراهای رنگی مثل DAB كه در روشهای IHC وابسته به سیستم پراكسیداز بكار میرود با تبدیل نیكل سولفات به نیكل میتواند شدت رنگ DAB را افزایش دهد ( این مكانیسم هنوز ناشناخته است).

 


site de rencontre americain pour ado
سه شنبه 22 مرداد 1398 06:00 ب.ظ
salope en polonais site de rencontre americain pour ado il baise ses filles site de rencontre web femme sexe gratuit
plan cul rhone pute de 20 ans ado salope suce porno gyneco
francais beurette trop bonne belle bourgeoise salope rencontre
ado 62 king porno baise en ascenseur salope dans un magasin baise
vf film sexe larry video porno rape elle baise devant
ses copines happy birthday sexe pull bande de salope salope du 85 maman salope avec sa fille handicap porno sexe vulgaire
bonne mature baise porno gag gros seins pute rencontre coquine cannes elle
baise en string eva notty porno maman cougar baise video porno vf porno securise porno laos porno 1978 making
of porno sexe en famille film exemple pseudo original
site de rencontre rencontre femme cherbourg salaire acteur porno kahba
pute film horreur porno gaul porno vieille salope tres poilue pute karlsruhe
chat de rencontre ado german mature porno partouze entre vieux sexe cholet rencontre femme morlaix
do australian citizens need a visa for turkmenistan
دوشنبه 21 مرداد 1398 10:29 ق.ظ
Nice post. I used to be checking continuously this blog and I am
inspired! Extremely useful info specifically the last section :)
I care for such info a lot. I was looking for this particular information for a
long time. Thank you and best of luck.
babes mermaid
دوشنبه 21 مرداد 1398 03:23 ق.ظ
Excellent way of explaining, and fastidious post to obtain facts regarding my presentation subject, which i am going to convey in school.
chauffeur inn
دوشنبه 21 مرداد 1398 02:17 ق.ظ
My brother recommended I might like this website.
He was entirely right. This submit truly made my day.

You can not believe just how so much time I had spent for this
information! Thank you!
when did nintendo start making games
دوشنبه 21 مرداد 1398 01:44 ق.ظ
Everything is very open with a really clear explanation of
the issues. It was definitely informative. Your
site is useful. Many thanks for sharing!
beurette dildo
شنبه 19 مرداد 1398 07:35 ب.ظ
torture de salope beurette dildo anne claire
coudray porno video sexe medecin porno exclu sexe dans
la cuisine site de rencontre turc en france video porno de grosse
salope rencontre etudiante sexe illustration porno je partouze ma femme plan baise brest video porno hot salope classe plan sexe video baise ultra sensuelle maman me fait une
branlette cliti beurette baise en sous bois video beurette salope baise apres un massage sexe teen hd rencontre femme enculeuse video tres sexe video sexe mature avec jeune video xxl porno femme
de menage salope mon porno du jour micro penis porno partouze avec des vieilles mom free sexe plan cul
albi femme enceinte sexe couple sans sexe ou trouver plan cul petite soeur salope sexe en culotte site
de rencontre amoureuse pour ado gratuit rencontre sexe puy de dome site de rencontre
pour une nuit jocelyne la salope rencontre sexe cholet site de
rencontre uk salope amatrice francaise massage du sexe porno tatouage baise bombe un plan cul cherche
video porno rencontre trans aix en provence plan cul verdun
https://www.liveinternet.ru/users/grantham_rindom/post456616034
شنبه 12 مرداد 1398 03:01 ب.ظ
I rattling pleased to find this web site on bing, just what I
was looking for :D too saved to my bookmarks.
chaturbate.c om
جمعه 11 مرداد 1398 05:51 ق.ظ
Also, try to know something. Every day will be a new experience for you because there's a never ending
list of women that you may pick from. Appearing barefoot in the photograph, Cam stated his following reminder is going to be to wear sneakers.
Our website allows you to view a complimentary cam show without spending a dime.
You can visit their website and understand the basics of your
personal computer and computer accessories, so you may use your computer at full advantage.
The person manual might be on the APP official site as opposed to combined with kit.
Welcome to Camsurf's arbitrary video chat program! There's also a handy
app as well that provides greater control within the camera/light.

On Camsurf you also can join with thousands of individuals from
all around the world in an enjoyable atmosphere.
Camsurf has thousands of users online at all times.

We can't say we have seen all of the women, since there are
literally thousands of babes, however we're trying our best.
1. Cookies that are needed to provide the service you have
asked for.
camera hải nam hà nội
شنبه 5 مرداد 1398 09:40 ق.ظ
I got this website from my friend who informed me regarding this
web page and at the moment this time I am visiting this website and reading very informative content at
this time.
istanbul escort
جمعه 4 مرداد 1398 06:27 ب.ظ
Hi! This is my first visit to your blog! We are a team of volunteers and starting
a new project in a community in the same niche.

Your blog provided us beneficial information to work on.
You have done a outstanding job!
blackout berry
دوشنبه 31 تیر 1398 11:39 ب.ظ
I'm gone to say to my little brother, that he should also visit
this web site on regular basis to take updated from latest news.
which states allow casinos
دوشنبه 31 تیر 1398 10:21 ب.ظ
What a information of un-ambiguity and preserveness of precious knowledge
regarding unexpected feelings.
how do you list certifications on a resume
دوشنبه 31 تیر 1398 09:08 ب.ظ
Hmm it looks like your site ate my first comment (it was super long) so I
guess I'll just sum it up what I submitted and say, I'm thoroughly enjoying your blog.
I too am an aspiring blog writer but I'm still new to everything.

Do you have any recommendations for rookie
blog writers? I'd really appreciate it.
Wesleydar
دوشنبه 31 تیر 1398 02:36 ب.ظ
viagra freebies
<a href="https://www.viagraforsalemsn.com/">viagra generic</a>
Mollie
یکشنبه 30 تیر 1398 10:09 ق.ظ
Great information. Lucky me I discovered your site by accident (stumbleupon).

I have saved as a favorite for later!
casual short sleeve v-neck female t-shirt elegant cotton tee shirt ladies tops
شنبه 29 تیر 1398 05:19 ب.ظ
Wonderful blog! I found it while browsing on Yahoo News.
Do you have any tips on how to get listed in Yahoo News? I've been trying
for a while but I never seem to get there! Thank you
888spins.com
شنبه 29 تیر 1398 04:04 ب.ظ
Hi there everybody, here every person is sharing such
experience, thus it's pleasant to read this blog, and I used to go to see this weblog everyday.
Wall Animal Outdoor Decor Miniatures Garden Decoration Statues for Garden Fairy Accessories Statues
پنجشنبه 27 تیر 1398 08:26 ق.ظ
Quality articles is the secret to attract the visitors to
pay a visit the website, that's what this web page is providing.
Fermin
پنجشنبه 27 تیر 1398 05:34 ق.ظ
I'd like to find out more? I'd care to find out some additional
information.
black dating
سه شنبه 25 تیر 1398 09:10 ق.ظ
darmowe porno animals black dating porno mexicano prinsesse porno svensk gratis porno top 10 dating sites
dlouhe porno porno for free german dating all russian porno dating for
gamere riding porno www darmowe filmy porno porno strong 3d cartoon porno russe porno porno videoer sleeping porno nigerian dating filme noi porno
hd porno gratis norske porno stjerner kelly porno
porno x video ver videos porno bike porno redtube porno good thai girl dating mor
son porno filme porno cu moldovence se pa porno free porno russian new dating app porno filim izle 3
movies porno dating cougars svampebob porno ukraine porno dating i norge
gratis filme porno cu moldovence porno poviedky bukkake porno flme porno porno finland porno
webcam puppen porno porno gyvai ladyboy dating site porno tenn webcam
porno gratis porno rus
chico busca chico granada
سه شنبه 25 تیر 1398 05:53 ق.ظ
sexo manga gratis chico busca chico granada webcam porno gratis pagina para conocer personas extranjeras universitarias sexo contactar
con mujeres para relaciones esporadicas videos porno descarga
conocer gente con camara web actrices porno francesas busco chica interna sevilla cortos porno gratis contactos chicas zaragoza
camaras porno ocultas busco chico valencia sexo gay anal contactos de chicas para salir chicas rubias porno
buscando mujeres solteras en espana sexo entre hombre conocer gente de todo el
mundo chat videos porno de hentai aplicaciones para
conocer gente apple videos porno gratis incesto contacto de chicas chat sexo vigo
pagina para conocer a gente sexo en las peliculas numero de telefono
de mujeres solteras videos porno nacho vidal contactos de mujeres en murcia videos
reales porno conocer gente mayor de 55 anos sexo lesvico paginas para encontrar mujeres solteras videos porno entre hermanos contactos con mujeres en antequera
sexo gay girona mujeres solteras en miami beach peliculas con sexo real chica busca chico
en girona anuncios mujeres que buscan hombres anuncios de mujeres que se venden estudiantes sexo mujer busca chico barcelona sexo rumano conocer
gente en ibiza videos porno de hombres contactar con mujeres para relaciones esporadicas videos porno manga redes para conocer personas de
otros paises videos porno de maduras infieles
hvordan date pa nett
سه شنبه 25 تیر 1398 05:18 ق.ظ
ulovlig porno hvordan date pa nett porno babysitters date kvinner i ski radiocarbon dating mote kvinne
dating love date kvinner i jessheim porno film gratis online norsk porno tumblr
latx porno dating i oslo farmowe filmy porno date kvinner
i kongsberg animal free porno dating norge gratis
arab porno video dating pa nett pris filmy darmowe porno norske amatorer porno norske porno filmer nettdating sporsmal grov porno porno
norske jenter norvegia porno singel i bergen flt dating date kvinner i askoy mature sex dating beste datingsider pa nett darmoew porno gratis sms dating norge shark dating simulator
singel oslo video porno amateur norsk hd porno dating
latvian girl norsk homo porno cuckold dating norsk teen porno teen porno hd date pa nett dating guide datesider norge domaci porno filmovi beste gratis dating app android filmy porno za darmo norske jenter dating bodo date
kvinner i leirvik sex porno com
video pute roumaine
سه شنبه 25 تیر 1398 12:31 ق.ظ
arabe baise blonde video pute roumaine porno snuff jupe levrette porno
hardcor levrette brunette medecin sexe jeune et vieux baise plan de sexe sexe a tout pris salope jeans naturiste salope avis site rencontre sexe video porno big ass rencontre femme roumaine serieuse video sexe cabine elle baise dans un cinema sexe tape valbuena une bonne baise francaise partouze baise
menage sexe de black baise en short sexe anti stress porno female agent
rencontre mature rousse poilue baise porno rico baise femme marie
pute belleville video sexe jeune et vieux elle partouze pute arras porno usa site
serieux de rencontre gratuit rencontre femme saone et loire belen rodriguez porno
belle salope de france salope blonde baise film porno homo porno ascenseur elle baise
son oreiller film de pute plan cul perigueux baise au bord de la piscine film porno homo partouze hd ffh porno blonde baisee en levrette partouze
hard amateur poupee gonflable sexe
std screening near me
جمعه 17 شهریور 1396 02:06 ق.ظ
این مقاله به کاربران اینترنت برای ایجاد وبلاگ جدید کمک خواهد کرد
یا حتی یک وبلاگ از ابتدا تا انتها.
chaturbate token generator free
دوشنبه 16 مرداد 1396 04:54 ب.ظ
Very great post. I simply stumbled upon your blog and wished to say that I
have truly enjoyed surfing around your blog posts. After all I will be subscribing
for your rss feed and I'm hoping you write again soon!
faranak
چهارشنبه 18 بهمن 1391 10:07 ق.ظ
tanks alot please give me more information a bout IHC.
محبوبه
سه شنبه 24 مرداد 1391 06:59 ق.ظ
درسته چیز زیادی نفهمیدم ولی افرین اقا عماد کارت درسته
....
چهارشنبه 31 خرداد 1391 11:43 ق.ظ

slaaaaam brgashtam hichi k naneveshtin ke
پاسخ : شما خب؟؟؟؟
...
جمعه 26 اسفند 1390 07:22 ب.ظ
..........................................
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر